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RayBiotech抗体芯片在乳头状甲状腺癌好转机制研讨的使用

公布日期:2018-05-23

杂志称号:Cell Death and Disease


文献标题:Yu, Shi-Tong, et al. "CRLF1 promotes malignant phenotypes of papillary thyroid carcinoma by activating the MAPK/ERK and PI3K/AKT pathways." Cell death & disease ###1.


第一作者:Shi-Tong Yu


通讯作者:Mu-Sheng Zeng、Xiao-Ming Huang

作者单元:Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, 107 Yanjiang West Road, Guangzhou, 510120, China


本实行所用产品:AAH-MAPK-1(人MAPK磷酸化信号通路芯片)


实行样品:乳头状甲状腺癌构造

研讨配景:

    乳头状甲状腺癌(PTC)是最广泛的内排泄癌症,是甲状腺癌近十年中发病率最高的范例。PTC通常可被治愈,5年生活率>95%,但在某些病例中,PTC去分解且伴有侵犯性。近期研讨标明,遗传学变革可经过MAPK/ERK和PI3K/AKT通路促进肿瘤增殖和转移,招致不良预后。对不良预后患者表达的基因举行基因图谱剖析,发明细胞因子受体样因子(CRLF1)在癌构造中有较大的变革,可作为PTC医治的潜伏靶点。CRLF1是一种排泄卵白,属于细胞因子受体家属,固然已有报道CRLF1能促进神经细胞生长和存活,但对其功效机制尚未明白。本文探求CRLF1在PTC中的表达和其在PTC中的次要功效与分子机制。



1 后果

1.1 生物信息学剖析阐明CRLF1可作为PTC的候选靶点基因

    为区分出PTC中潜伏的肿瘤相干基因,生物信息软件剖析TCGA数据,发明了197个候选基因。取PTC构造经过定量逆转录PCR(qRT-PCR)验证,发明CRLF1 mRNA和CRLF1卵白表达程度分明偏高。(图a)对差别细胞系(TPC-1、 IHH-4、 B-CPAP、8305C 、SW579、Nthy-ori 3-1)举行qRT-PCR和免疫印迹(WB),发明CRLF1 mRNA和卵白只在B-CPAP (PTC细胞系)和 8305C (甲状腺未分解癌) 表达(图d)。标明CRLF1高表达于PTC,尤其是那些伴有淋逢迎转移或癌症早期的患者中。

 

1.2 CRLF1高表达与侵犯性临床病理特性和低生活率有关

     为了进一步研讨CRLF1表达量和癌症临床病理特性的相干性,免疫组化剖析201份PTC切片样本。后果标明,有83个样本(41.3%)高表达CRLF1,高表达CRLF1与肿瘤巨细、甲状腺外分散、T期、N期和临床期有关(表1)。将病患分为两个组(I/II期和 III/IV期),发明高表达CRLF1的患者样品伴有较差的疾病生活率(DFS)(图d/e)后果阐明,CRLF1表达程度与低生活率有关,CRLF1卵白表达量对PTC有紧张的预后作用。

 

1.3 CRLF1促进PTC细胞增殖

      经过对CRLF1基因举行功效取得型(渐变)和功效缺失型(渐变)实行,探求CRLF1的作用。B-CPAP细胞中CRLF1经siRNAs (si-1#和si-2#)处置后被克制,B-CPAP细胞增殖速率和克隆构成才能低于比较组(si-NC)。将超表达的CRLF1的TPC-1细胞系(低表达CRLF1)中,发明CRLF1非常表达加强细胞增殖才能(图f/g)。评价CRLF1对体内肿瘤生长的作用结果, CRLF1超表达的IHH-4 细胞,细胞生长更快且面积更大(图h)。后果阐明CRLF1促进肿瘤体外和体内增殖。

                   

 

1.4 CRLF1促进PTC细胞迁徙和侵入并诱导上皮间质转化

    由于CRLF1表达程度与N期和M期有关,九游会进一步研讨CRLF1能否影响B-CPAP 细胞迁徙才能和侵入才能,后果转染si-CRLF1-1#或 si-CRLF1-2#的细胞迁徙才能分明低于si-NC组,阐明CRLF1进步PTC细胞的迁徙才能和侵入才能。TPC-1和IHH-4细胞中CRLF1非常表达能促进迁徙和侵入,阐明CRLF1能加强PTC细胞的迁徙才能和侵入才能(图c)。实行研讨CRLF1能否影响PTC细胞的上皮间质转化(EMT),后果钙粘卵白表达下调。间叶细胞标志物(波形卵白、纤粘连卵白)表达程度上调,证明CRLF1在PTC细胞中诱发EMT(图f)。CRLF1敲除克制细胞生长入侵,进一步阐明CRLF1大概促进PTC细胞恶性表型。

 

          

 

1.5 CRLF1经过MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路调控致瘤

        为了确定CRLF1在PTC细胞中影响肿瘤构成的潜伏机制,利用磷酸化信号检测芯片检测IHH-4细胞。在CRLF1超表达的IHH-4细胞中AKT (p-S473) 和 ERK1/2 (p-T202/Y204, p-Y185/Y187)磷酸化程度降低(图a)。WB剖析,发明CRLF1大概激活JAK2和SHP2磷酸化,从而激活ERK1/2和AKT(pS473)磷酸化。在CRLF1超表达的IHH-4肿瘤细胞中p-ERK1/2和 p-AKT高表达。参加U0126 ( MEK 克制剂) 和 MK-2206 ( AKT克制剂),判别克制剂能否可以影响IHH-4-CRLF1癌细胞的生长,后果ERK 和 AKT表达程度下调,阐明CRLF1大概经过局部MAPK/ERK和 PI3K/AKT信号通路调控肿瘤构成(图d)。

                 


 

结论

 

   在本文中,起首验证了CRLF1可以加强PTC癌细胞的浸润才能,招致不良预后,紧接着经过磷酸化信号检测芯片,发明了CRLF1非常表达大概激活JAK2和SHP2磷酸化,接着激活MAPK/ERK 和 PI3K/AKT信号通路调控肿瘤构成。本研讨阐明了CRLF1对癌细胞疾速生长和克隆的紧张作用,为进一步研讨PTC有紧张意义。

 

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