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RayBio抗体芯片在杜氏肌养分不良症中研讨的使用

公布日期:2018-01-22

杂志称号:Cellular and Molecular Life Sciences


文献标题:Lecompte, Sophie, et al. "Skeletal muscle secretome in Duchenne muscular dystrophy: a pivotal anti-inflammatory role of adiponectin." Cellular and Molecular Life Sciences 74.13 (2017): 2487-2501.


第一作者:S. Lecompte


作者单元:

Endocrinology, Diabetes and Nutrition Unit, Institute of Experimental and Clinical Research, Catholic University of Louvain


本实行所用产品:RayBio人 AAH-CYT-1000抗体芯片(120个细胞因子抗体芯片)


实行样品:细胞培育上清


研讨配景:

杜氏肌养分不良是一种X染色体隐性遗传疾病,次要产生于男孩。据统计,环球均匀每3500个复活男婴中就有一人罹患此病。患者在学龄前就会因骨骼肌不停退步呈现肌肉有力或萎缩,招致方便行走。大约在7岁到12岁时,会彻底丢失行走才能,通常到20多岁就会由于心肌、肺肌有力而殒命。针对该病,医学界尚无无效疗法。杜氏肌养分不良,一种危害人们的安康的疾病。肌养分不良卵白缺陷型肌纤维的紧缩会发生严峻的毁伤,并发生肌纤维坏去世和再生的循环。这些改动招致慢性炎症,这是这种疾病的发病机制的要害特性。在这种状况下,细胞因子和趋化因子在DMD相干的肌肉炎症中发扬紧张和多样化的作用。后期研讨标明脂联素(ApN)在骨骼肌上体现出抗炎性子,并加重mdx小鼠的养分不良表型。在这里,九游会研讨ApN能否在DMD患者取得的肌管细胞中保存其抗炎作用。九游会经过研讨其排泄物和ApN的晚期干系来揭开潜伏的机制。

    

        


1 分组


细胞培育上清样本:

DMD构成肌细胞上清(n=4)

比较构成肌细胞上清(n=3)

2 后果

2.1  DMD组及比较组肌小管细胞判定

成肌细胞分解为肌管在比较(C)和DMD细胞之间没有差别,如分解开端后第0,3和11天(即分解前后,中期和早期阶段)。更详细地说,在第11天,成熟肌管在两组中体现出相反的特性性。异样,在分解历程中,在C和DMD细胞中,肌原性标志的基因表达也类似地增长。


2.2 DMD组及比较组本身的脂联素表达

九游会检测了底子形态下ApN的消费。与比较组相比,养分不良肌管的ApN mRNA和卵白表达辨别降落约6015 这表示了DMD肌管中ApN的潜伏缺陷,并支持保举肌养分不良中ApN增补的实际。


2.3 脂联素在人类比较和DMD肌管中的抗炎特征

随后对ApN医治能否在养分不良肌肉中坚持其抗炎特征举行研讨。为了模仿DMD的炎症微情况,经过炎症因子(TNFα/IFNγ)对肌管举行了安慰,TNFα在好转疾病中起着要害的致病作用。在C肌管中,TNFα与INFγ联合诱导其本身的基因表达,IL-6的表达被以为是抵挡炎症形态的体现。陪同的ApN医治,TNFα基因表达的下调(〜-30%),进一步上调IL-6(〜+ 75%)的表达。ApN实践上下调了TNFα mRNA(〜-25%),同时进一步上调IL-6mRNA(〜+ 20%)。 这些数据标明ApN大概在养分不良的肌肉中保存其抗炎特征。


2.4 抗体芯片挑选ApN作用下细胞上清中的差别因子

挑选来自DMD肌管的培育基在或不存在ApN处置的状况下炎症安慰所惹起的变革。在测试的120个细胞因子中,64个由肌管排泄。在ApN存在的状况下,10种卵白排泄有差别:8种细胞因子低排泄,而别的两种则排泄过量。这些肌肉卵白属于五个家属:促炎因子和抗炎因子/细胞因子,生长因子,可溶性受体和趋化因子。接上去用ELISA定量这些差别因子举行验证。后果标明,经过ApN处置下调两种促炎因子(TNFα和IL-17A),一种可溶性受体(sTNFRII)和一种趋化因子(CCL28)的排泄。相反,只要IL-6上调,其大概具有抗炎特征。



2.5  ApN在比较组和DMD肌管中的抗炎作用的机制

接上去研讨毗连AdipoR1-SIRT1-PGC-1α的信号通路能否到场了DMD肌管中ApN的抗炎作用。为此,利用特异性siRNA敲除了该途径的每个组分。起首证明,siRNA缄默是无效的,如靶基因表达的明显低落(-65至-95%)。接上去,证明在C肌管中,ApN在存在的条件下发扬其抗炎作用:它低落TNFα(〜55%)和CCL28(-28%) 同时增长IL-6 mRNA(+ 40%)。

当用针对AdipoR1,SIRT1或PGC-1α的siRNA转染肌管时,这些变革被消弭。因而,AdipoR1-SIRT1-PGC-1α信号通路的每个组分好像是ApN在C和养分不良肌肉中的抗炎作用所必须的。


结论:

起首,与比较组相比,养分不良肌管的底子ApN表达和排泄低落。之前的研讨曾经标明,在急性或慢性炎症的情况中,ApN在体内被“正常”的小鼠骨骼肌过分发生,以部分抵消过分和无害的炎症反响。相比之下,mdx小鼠的骨骼肌不克不及部分过分发生ApN。异样,这种状况好像在人类养分不良肌管中也有异样的体现,与比较相比,ApN表达低落。这标明在DMD肌管中ApN的潜伏缺陷,并支持在该病理学中保举ApN增补的说法。 ApN对肌细胞排泄情况的影响仍旧很大水平上是不明白的。为了研讨ApN医治前后DMD肌管的排泄物谱。利用Rybiotech的细胞因子抗体芯片举行检测并用ELISA办法举行验证,九游会确定了几种由人类养分不良肌管排泄的肌动卵白是由ApN调治。这些肌肉卵白属于四个家属:抗炎因子/细胞因子,可溶性受体和趋化因子。ApN下调了几种促炎症分子(TNFα,IL-17A和CCL28),同时上调IL6,其在免疫应对中起双重作用。据九游会所知,这两种分子(sTNFRII,CCL28)是人肌管的新型排泄产品。ApN经过AdipoR1和AMPK-SIRT1-PGC-1α途径介导其对控制肌管的掩护,从而招致转录因子NF-κB表达下调。总之,ApN经过激活AdipoR1和AMPKSIRT1-PGC-1α途径在养分不良的肌肉中坚持其无益的性子,从而诱导卑鄙肌肉排泄向较少炎症散布的变化,同时上调utrophin A、及其卑鄙肌肉ApN,这机制大概成为医治DMD的要害点,Raybiotech的抗体芯片在该机制的研讨中起紧张作用。



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